超聲細(xì)胞破碎材料與方法

１．１材料與試劑黑桑葚干：新疆和田市絲路果果特產(chǎn)；石油醚（沸程３０～６０℃）、三氯甲烷、正丁醇、９５％乙醇：分析純，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司。

１．２儀器與設(shè)備超聲波細(xì)胞破碎儀：ＴＬ－ＳＴ４００型，江蘇天翎儀器有限公司；高速多功能粉碎機(jī)：ＲＨＰ－２０００Ａ型，天津榮浩機(jī)電設(shè)備有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋：ＨＨ－４型，上海樹立儀器儀表有限公司；高速離心機(jī)：ＴＣＬ－１６型，常州金壇良友儀器有限公司；粗脂肪測定儀：ＳＺＦ－０６Ａ型，上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱：ＤＧＨ－９１４０Ａ型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

１．３方法

１．３．１桑葚樣品處理將桑葚干樣品烘干至恒重，粉碎，過７０目篩后密封保存?zhèn)溆谩＃保常裁撝瑓⒄眨牵拢担埃埃梗?/span>—２０１６并修改。稱取處理好的桑葚樣品４．０００ｇ，水浴溫度７０℃回流抽提４ｈ，控制每分鐘８０滴左右。脫脂后濾掉廢液得桑葚樣品。１．３．３細(xì)胞破碎儀輔助熱水浸提桑葚多糖稱取脫脂后的桑葚樣品１．０００ｇ，按料液比１:３０（ｇ／ｍＬ）加入蒸餾水，６５℃恒溫水浴鍋中用細(xì)胞破碎儀輔助浸提，將超聲波細(xì)胞破碎儀變幅桿末端插入液面８ｍｍ并使其位于容器中心位置。變幅桿轉(zhuǎn)換開關(guān)打到Φ６，設(shè)置超聲時(shí)間１．２ｓ，間歇時(shí)間１．５ｓ，用紗布過濾混合物，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，收集上清液，６５℃水浴濃縮至液體體積為１０ｍＬ。

１．３．４桑葚多糖的脫蛋白根據(jù)文獻(xiàn)稍作修改：將濃縮后的桑葚樣品置于分液漏斗中，按體積比１:２加入Ｓｅｖａｇ試劑（Ｖ三氯甲烷:Ｖ正丁醇＝４:１），充分搖勻，靜置，待分液漏斗中液體分層完畢后，除去底層的有機(jī)溶劑及中間層的蛋白質(zhì)，收集上層液，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，除去殘留蛋白質(zhì)，收集上清液備用。１．３．５桑葚多糖的制備向脫蛋白后的上清液中加入４倍體積９５％乙醇，混勻靜置片刻后沉淀析出，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，棄上清，將沉淀放置于蒸發(fā)皿中，６５℃干燥１．５ｈ，即為桑葚多糖提取物。